Die Gründungsstifter dieser in einer historischen Kulturandschaft aktiven Stiftung sind Kommunen, Landkreise, Agrarbetriebe des Spreewaldes aber auch Privatpersonen und Tourismusanbieter. In der Stiftung wird bürgerschaftliches Engagement für den Erhalt dieser einzigartigen Region mit den traditionellen, kleinflächigen Bewirtschafts- und Nutzungsformen, der typischen Siedlungsstruktur und der naturraumbedingten Vielfalt von Arten und Lebensräumen gefördert und gebündelt. Zweck der Stiftung ist es, Projekte und Konzepte zu fördern bzw. auch direkt zu unterstützen, die einen Beitrag zur nachhaltigen Entwicklung und Bewahrung der von Menschenhand geprägten Kultur- und Naturlandschaft des UNESCO Biosphärenreservates Spreewald leisten.
So organisiert und finfanziert die Bürgerstiftung z.B. gemeinsam mit dem Förderverein Lehde die regelmäßige Mahd der Wasserschlagwiese im Ortseingangsbereich Lehde um eine Verbuschung zu vermeiden. Die Bürgerstiftung Kulturlandschaft Spreewald unterstützt auch die gezielte
vegetative Vermehrung und Vermarktung des Spreewälder Meerrettichs. Der Anbau dieser Kulturpflanze mit regionaler Herkunft dient der Erhaltung der biologischen Vielfalt und der Attraktivität der Kulturlandschaft Spreewald. Aus diesem Projekt ging der Stiftungs-Meerrettich hervor, aus einem weiteren Projekt in Zusammenarbeit mit regionalen Imkern und dem Länderinstitut für Bienenkunde der Stiftungs-Honig.
Die Stiftung ist für lokale Ideen und Akteure offen bzw. hält Einzelprojekte zur Förderung vor.